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HH型水浴鍋用于多酚氧化酶的酶學(xué)特性分析

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2021-07-02 08:51【

    三相分離法是一種提取和部分純 化桔皮 POD 的理想方法;Gagaoua 等采用三相分 離法從無花果樹中純化蛋白酶,三相分 離法是一種簡單、經(jīng)濟(jì)、快捷的純化蛋白酶的方法。 但目前尚鮮見關(guān)于利用三相法分離純化滁菊 PPO 。采用三相分離法純化 滁菊 PPO,并對其酶學(xué)特性進(jìn)行分析,以期為滁菊 采后褐變的控制提供一些理論支持。L3S 型紫外可見分光光度計,上海儀電分析儀 器有限公司;BSA124S-CW 型電子天平,賽多利斯 科學(xué)儀器(北京)有限公司;超聲波清洗器,寧波 海曙科生超聲設(shè)備有限公司;HHS-21-4 型恒溫水浴鍋, 上海博迅實業(yè)有限公司;TGL-16M 型高速臺式冷凍 離心機(jī),湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司; PHS-3C 型 pH 計,上海越平科學(xué)儀器有限公司。

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    在加入叔丁醇后,體系會形成三相,但中間沉 淀層富含蛋白容易發(fā)生乳化現(xiàn)象?,F(xiàn)考察三相分離 的靜置時間對滁菊 PPO 純化效果的影響,三相分離過程中靜置時間對滁菊 PPO 回 收率和純化倍數(shù)沒有促進(jìn)作用,經(jīng)靜置 5 ~ 80 min 后離心,中間相均可形成一層薄薄的蛋白沉淀層, 經(jīng)回收后測定其酶活回收率在 79.2% ~ 87.7%之間, 純化倍數(shù)在 3.1 ~ 4.2 倍之間。由此可見,在三相分 離純化蛋白質(zhì)過程中,在加入叔丁醇混勻后即開始 離心分離,可以縮短三相分離的時間。以鄰苯二酚為底物, 其反應(yīng)的最適pH值為6.50,最適反應(yīng)溫度為30 ℃, 底物最適濃度為 0.35 mol·L-1,底物 Km和 Vmax 分別 為 0.174 9 mol·L-1 和 961.538 5 U·min-1。滁菊 PPO 對 pH 值和溫度的變化都比較敏感,在 pH 值為 9 的條件下殘存酶活僅剩 24%;70 ℃加熱 3 min,殘 存酶活僅剩 25%,加熱 10 min 殘存酶活僅剩 7.29%。





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